For å forhindre kryssforurensning under drift er hovedkravene for design, konstruksjon og driftsstyring:
1. Laboratorieutforming og -konstruksjon, trygt arbeidssystem eller sikkerhetsstandard driftsprosedyrer skal oppfylle kravene i gjeldende GG-kvote; Generelle krav til Laboratorium Biosafety" GB19489.
2. PCR er delt inn i fire funksjonelle områder i henhold til arbeidstrinnene, nemlig reagenslagrings- og klargjøringsområde, prøveforberedelsesområde, forsterkningsområde og amplifiseringsproduktanalyseområde. Hvis et fluorescerende PCR-instrument i sanntid er utstyrt, kan områdene med forsterkning og produktanalyse kombineres. Hvert funksjonsområde må være tydelig merket, og utstyr og artikler i forskjellige funksjonsområder må ikke blandes.
Luftstrømningsretningen til PCR-laboratoriet kan utføres i samsvar med reagenslagrings- og klargjøringsområdet → prøvefremstillingsområde → forsterkningsområde → amplifisert produktanalyseareal for å forhindre at de forsterkede produktene kommer inn i det forforsterkede området sammen med luftstrømmen. Det kan utføres på en måte å redusere lufttrykket fra reagenslagring og klargjøringsområde → prøvefremstillingsområde → forsterkningsområde → forsterkningsproduktanalyseområde. Det kan oppnås ved å installere eksosvifter, eksosanlegg for undertrykk eller andre gjennomførbare metoder.
3. Å komme inn i hvert arbeidsområde bør strengt tatt følge en retning, det vil si reagenslagring og klargjøringsområde → prepareringsområde for prøve → forsterkningsområde → analyseområde for forsterkningsprodukt. Ulike arbeidsområder (for eksempel forskjellige farger) bør brukes. Arbeidstakere skal ikke ta ut arbeidsklær når de forlater hvert arbeidsområde.
4. Rengjøring av laboratoriet skal utføres i retning av reagenslagring og klargjøringsområde → prøvelagringsområde → forsterkningsområde → forsterket produktanalyseareal. Ulike eksperimentelle områder bør ha egne rengjøringsapparater for å forhindre kryssforurensning.
5. Etter at arbeidet er over, må arbeidsområdet rengjøres umiddelbart. Overflaten på laboratoriebenken i arbeidsområdet skal kunne tåle desinfeksjons- og rengjøringseffekten av kjemikalier som natriumhypokloritt. Den ultrafiolette bestrålingen på overflaten av laboratoriebenken skal være praktisk og effektiv. Siden avstanden og energien til den ultrafiolette bestrålingen er veldig kritisk for dekontamineringseffekten, kan en bevegelig ultrafiolett lampe (254nm bølgelengde) brukes, og etter at arbeidet er fullført, kan det justeres til å bestråles innen 60-90 cm på forsøksbordet . Siden det forsterkede produktet bare er noen hundre eller titalls basepar (bp), er det ikke følsomt for UV-skade, så det UV-bestrålte amplifiserte fragmentet må bestråles i lengre tid, fortrinnsvis over natten.
Funksjonene til reagenslagrings- og prepareringsområdet er: fremstilling av lagringsreagenser, dispensering av reagenser og fremstilling av forsterkningsreaksjonsblandingen, samt lagring og klargjøring av forbruksvarer som sentrifugerør og tips. Materialer som lagringsreagenser og forbruksartikler som brukes til preparering av prøver, bør transporteres direkte til reagenslagrings- og prepareringsområdet, og kan ikke passere gjennom amplifiseringsdeteksjonsområdet. De positive kontrollmaterialene og kvalitetskontrollmaterialene i settet skal ikke lagres i dette området, men bør lagres i dette området. Prøvebehandlingsområde.
Funksjonen til preparatet av prøven er: ekstraksjon av nukleinsyre (RNA, DNA), lagring og tilsetning til amplifikasjonsreaksjonsrøret. For operasjoner som involverer kliniske prøver, må kravene til verneutstyr, personlig beskyttelse og driftsspesifikasjoner for biosikkerhet sekundære laboratorier være oppfylt. Siden forurensning med aerosoler kan forekomme under prøveblanding og rensing av nukleinsyre, kan forholdene for positive trykk etableres i dette området for å unngå aerosolkontaminering fra nærliggende områder. For å unngå krysskontaminering mellom prøvene, etter tilsetning av nukleinsyren som skal testes, må reaksjonsrøret som inneholder reaksjonsblandingen tildekkes. For potensielt smittsomme materialer må lokket åpnes i det biologiske sikkerhetsskapet, og det må være klare prosedyrer for prøvehåndtering og inaktivering.
Funksjonen til amplifiseringssonen er: DNA-syntese, DNA-amplifisering og deteksjon. For å unngå forurensning forårsaket av aerosoler, bør gåing i området minimeres. Det må bemerkes at alle testede reaksjonsrør ikke må åpnes i dette området.
Funksjonen til det amplifiserte produktanalysearealet er: ytterligere analyse og bestemmelse av amplifiserte fragmenter, så som hybridisering, enzymfordøyelseselektroforese, denaturering av høyytelsesvæskeanalyse, sekvensering, etc. Nukleinsyre-amplifiseringsprodukter har forskjellige analysemetoder, for eksempel sondehybridiseringsmetoder. på membraner eller på mikroplater eller flis (radionuklidmerking eller ikke-radioaktiv nuklidmerking), direkte eller fordøyd agarosegelelektroforese, Polyacrylamide gelelektroforese, sørlig overføring, nukleinsyresekvenseringsmetoder, massespektrometri, etc.
Analysearealet for amplifiseringsprodukter er den viktigste kilden til forsterkningsproduktforurensning i PCR-laboratoriet, så det bør tas forsiktighet for å unngå å føre amplifiseringsproduktet ut gjennom artiklene og arbeidsklærne i dette området. Ved bruk av PCR-ELISA-metoden for å detektere forsterkede produkter, må en plateskive brukes til å vaske platene, og avfallsvæsken må samles i 1 mol / L HCl, og kan ikke helles i laboratoriet, men skal kastes bort fra PCR-laboratoriet. Miste. Den brukte spissen må også bløtlegges i 1 mol / L HCl og deretter legges i en søppelpose for avhending i henhold til prosedyrer, for eksempel forbrenning. Siden dette området kan bruke visse genetiske mutasjoner og giftige stoffer som etidiumbromid, akrylamid, formaldehyd eller radionuklider, etc., bør eksperimenternes sikkerhetsbeskyttelse tas hensyn til.